外泌體(Exosome)是由不同細(xì)胞分泌的直徑 30-150nm 的胞外膜性囊泡。外泌體內(nèi)容物豐富,包括蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸等,在細(xì)胞間信息交流中發(fā)揮著重要作用,并與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展、治療及預(yù)后密切相關(guān)。
作為天然的胞間信息載體,外泌體免疫原性低,生物相容性高,在人體血液中比較穩(wěn)定。能夠利用增強(qiáng)滲透滯留效應(yīng)(Enhanced Permeation and Retention effect,EPR),有選擇性的滲透和滯留在腫瘤或炎癥組織部位,可穿透血腦屏障等。不僅可以通過其內(nèi)源內(nèi)容物直接對受體細(xì)胞進(jìn)行治療,也可以作為藥物載體,遞送化學(xué)藥物、蛋白質(zhì)、多肽及基因藥物,在醫(yī)療領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用潛力。
為了增強(qiáng)外泌體的治療效果,降低對正常細(xì)胞的毒害,需提高外泌體的靶向遞送能力,目前科研常用方法是基因改造分泌外泌體的細(xì)胞,利用重組克隆質(zhì)粒,在細(xì)胞中表達(dá)靶向蛋白或多肽-外泌體膜蛋白復(fù)合體,收集釋放的外泌體,來獲得靶向外泌體,但該方法修飾效率低,且部分細(xì)胞轉(zhuǎn)染困難,難以大規(guī)模制備。生物素和鏈霉親和素之間具有極高的親和能力,反應(yīng)高度專一,形成復(fù)合物的解離常數(shù)很小,呈不可逆反應(yīng)性,產(chǎn)物穩(wěn)定性高,目前生物素-親和素系統(tǒng)在生物領(lǐng)域已成為了一種通用普適的研究方法。
本試劑盒首先通過化學(xué)連接的方法,將生物素偶聯(lián)在外泌體表面,通過 SEC 分子排阻柱去除游離的生物素,得到大量純凈的生物素化外泌體。生物素化的外泌體先通過與鏈霉親和素結(jié)合(含有 4 個生物素結(jié)合位點(diǎn)),然后再與帶有生物素標(biāo)記的蛋白、多肽、小分子和核酸進(jìn)行連接,最后實現(xiàn)蛋白、多肽、小分子、核酸在外泌體表面的修飾(靶向)。
本試劑盒反應(yīng)條件溫和,生理條件下即可發(fā)生反應(yīng),反應(yīng)特異性好,無有害副產(chǎn)物,不損傷外泌體膜結(jié)構(gòu),也不影響外泌體的生物活性和功能,為外泌體表面修飾提供了一個高效、通用的修飾平臺。