Q 什么是外泌體?查看詳情
A外泌體(Exosome)是由不同細(xì)胞分泌的直徑30-150nm的胞外膜性囊泡(Extrocellular Visicles,EVs)。外泌體普遍存在于多種體液中,其內(nèi)容物豐富,包括蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸等,在細(xì)胞間信息交流中發(fā)揮著重要作用,主要參與免疫抗原呈遞,神經(jīng)遞質(zhì)傳遞,脂類代謝,及細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程,并與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展、治療及預(yù)后密切相關(guān)。
Q 外泌體分離后會(huì)有沉淀試劑留在純化的外泌體中嗎?如果有的話,會(huì)對下游實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響嗎?查看詳情
A沉淀試劑不會(huì)吸附在外泌體上,所以沉淀試劑仍留在上清中,但如果在沉淀離心去除上清時(shí)沒有完全的把上清除去的話,會(huì)留下少量的沉淀試劑在外泌體中,但含量很低,可以通過透析去除。
Q 用超速離心的方法分離細(xì)胞培養(yǎng)上清的外泌體,但是電鏡下沒有找到外泌體,什么原因呢?查看詳情
A超速離心提取外泌體的量要低于外泌體沉淀試劑提取,更何況在細(xì)胞培養(yǎng)上清中外泌體的含量很低,所以分離出來的外泌體不容易找到,你可以 Nanosight analysis或者其他方法去證明你提取外泌體的含量。
Q 外泌體傳統(tǒng)的分離方法是什么?查看詳情
A傳統(tǒng)的外泌體分離方法主要采用超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度,將低密度的外泌體從其他囊泡中分離出來,但其操作流程復(fù)雜且耗時(shí)較長(大約需要8-24h),盡管這樣,超速離心仍然是最為流行的外泌體分離方法。在過去的幾年里,一些由于細(xì)胞培養(yǎng)基和各種體液的外泌體分離試劑盒已經(jīng)商業(yè)化了,潤基生物的外泌體提取和純化試劑盒是一種操作方便,提取外泌體純度高的外泌體提取工具,相信這款產(chǎn)品會(huì)越來越受歡迎。
Q 外泌體提取試劑盒的工作原理是什么?如何把外泌體分離出來?查看詳情
A是通過一種聚合物將外泌體分離的,這種聚合物會(huì)破壞溶液中的水分子,使囊泡顆粒(包括外泌體)和一些較大蛋白質(zhì)溶解度降低,通過低速離心就可以沉淀收集。
Q 我如何確保提取外泌體不是細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)(如細(xì)胞碎片等)?查看詳情
A當(dāng)你從細(xì)胞培養(yǎng)基或各種體液分離外泌體前,首先需要經(jīng)過樣本預(yù)處理,樣本先經(jīng)過低速離心,就可以去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片,處理后樣本中只留有外泌體,囊泡和蛋白質(zhì)。