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      在細(xì)胞外囊泡（EV）的分離實驗中，來源于血清血漿的細(xì)胞外囊泡的分離純化是比較棘手的，原因是血液樣本的的成分比較復(fù)雜，很容易造成細(xì)胞外囊泡的污染，血清血漿中的脂蛋白顆粒就是細(xì)胞外囊泡難以分離的污染物之一。

      細(xì)胞外囊泡（EV）和脂蛋白顆粒都是血液循環(huán)系統(tǒng)中的納米顆粒，執(zhí)行著許多生物學(xué)功能：

脂蛋白：是血液中膽固醇的載體，可以運載膽固醇到各種細(xì)胞或組織，滿足各個組織細(xì)胞對膽固醇的需要。按照密度分類：低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、極低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒（CM）。

細(xì)胞外囊泡：從細(xì)胞膜上脫落，由細(xì)胞分泌而成的，具有磷脂雙分子層的膜性囊泡?？梢詳y帶生物活性物質(zhì)（蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸等），轉(zhuǎn)遞到受體細(xì)胞，參與細(xì)胞間通訊。

▲細(xì)胞外囊泡與脂蛋白的體積、密度比較圖

外泌體與脂蛋白的體積和密度如此相近，以至于很多傳統(tǒng)的方法都不能夠把他們完全分離。

1.密度梯度超速離心：高密度脂蛋白（HDL）的密度最與細(xì)胞外囊泡相近，所以它是密度梯度離心最主要的污染脂蛋白。低密度脂蛋白（LDL）雖然密度略低于細(xì)胞外囊泡（EV），但密度梯度離心的方法不足以完全的把他們分開，而且低密度脂蛋白在血漿含量特別多（約10的15次冪particles/mL），細(xì)胞外囊泡在血漿含量（10的10次冪particles/mL左右）。在低密度脂蛋白如此大的數(shù)量基數(shù)下，密度相差不大的細(xì)胞外囊泡和低密度脂蛋白，很難用密度梯度離心完全分離。

2.分子排阻法（SEC）：分子排阻法分離細(xì)胞外囊泡的原理是利用了細(xì)胞外囊泡與其他雜質(zhì)的粒徑大小，由上圖可以看出分子排阻法也不能夠完全從血漿的細(xì)胞外囊泡中分離開低密度脂蛋白（LDL）和極低密度脂蛋白（VLDL）。

3.超速離心法：所謂的"金標(biāo)準(zhǔn)"—超速離心也容易引起脂蛋白的污染，因為在恒定加速度下，球形物體的沉降速率與顆粒密度和介質(zhì)密度之差以及顆粒粒徑的平方成正比。也就是說，介質(zhì)和轉(zhuǎn)數(shù)恒定，在粒徑和密度相差不大的情況下，顆粒的沉降速率也相差不大，更何況脂蛋白的顆粒數(shù)高于外泌體數(shù)萬倍，在如此高的數(shù)量基數(shù)下，超速離心是不能夠完全分離純凈的外泌體的。

文獻(xiàn)來源： What Are We Looking At? Extracellular Vesicles, Lipoproteins, or Both?  2017

外泌體提取和純化試劑盒