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EXO-DNA Circulating and EV associated DNA extraction kit
文章來(lái)源：
發(fā)布時(shí)間：2018-08-20 13:33:39
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外泌體（Exosome）是由不同細(xì)胞分泌的直徑30-150nm 的胞外膜性囊泡(Extrocellular Visicles，EVs）。外泌體普遍存在于多種體液中，其內(nèi)容物豐富，包括蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸等，在細(xì)胞間信息交流中發(fā)揮著重要作用。近年來(lái)，液體活檢作為一種新的非侵入式主要檢測(cè)血液中循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating Tumor Cell，CTC）和循環(huán)腫瘤DNA(Circulating Tumor DNA，ctDNA)，獲取患者腫瘤病變信息，用以幫助診斷治療。研究表明，在外泌體中已檢測(cè)到基因組DNA 和線(xiàn)粒體DNA，通過(guò)提取和檢測(cè)外泌體中DNA突變，可作為液體活檢的另一種選擇。




外泌體提取和DNA分離試劑盒（Exosome Extraction & DNA Isolation Kit）結(jié)合我們的外泌體提取試劑，能夠從細(xì)胞培養(yǎng)上清或體液（血清/血漿等）中同時(shí)分離外泌體和循環(huán)DNA。利用優(yōu)化的裂解液提取已分離的外泌體DNA，采用吸附柱（Spin Columns）法方便、快捷地純化、洗脫外泌體DNA，可直接用于下游應(yīng)用，如real time PCR，Expression Array Assays，NGS等。





  1. 可獲得回收率、高純度游離DNA和外泌體相關(guān)DNA。

  2. 操作簡(jiǎn)單、快捷，不需要額外儀器設(shè)備。

  3. 可小體積洗脫。

  4. 適合后續(xù)各種DNA實(shí)驗(yàn)，如qPCR或數(shù)字





  1. 可簡(jiǎn)單、快速富集各種樣本中游離DNA和外泌體顆粒。

  2. 可通過(guò)DNase I處理降解樣本中游離DNA，而外泌體中DNA不受影響，可單獨(dú)純化外泌體中DNA。

  3. 可應(yīng)用qPCR或數(shù)字PCR檢測(cè)和發(fā)現(xiàn)突變，應(yīng)用于液體活檢。

  4. 提取的DNA可用于構(gòu)建文庫(kù)及測(cè)序。





收集臨床診斷為腸癌患者，應(yīng)用“外泌體提取和DNA分離試劑盒”中外泌體提取試劑沉淀血漿中外泌體顆粒，分別經(jīng)過(guò)Dnase I處理和不經(jīng)過(guò)Dnase I處理來(lái)區(qū)分提取的外泌體相關(guān)DNA，應(yīng)用安捷倫2100 Bioanalyzer測(cè)定DNA分布圖（圖1），從中得出：外泌體提取試劑不僅能富集血漿中外泌體顆粒，同時(shí)血漿中游離DNA也能被沉淀下來(lái)，經(jīng)過(guò)Dnase I消化，可以降解血漿中游離DNA，但外泌體膜性結(jié)構(gòu)可阻止Dnase I對(duì)外泌體內(nèi)含物DNA消化。以提取的DNA為模板，應(yīng)用ARMS-PCR技術(shù)對(duì)KRas突變檢測(cè)（圖2），在KRas突變的腸癌患者中，檢測(cè)的Ct值較健康人小，同時(shí)經(jīng)過(guò)Dnase I處理，可提高腸癌患者與健康人Ct值差值（△Ct）檢測(cè)的特異性和靈敏度。



圖1：DnaseⅠ處理對(duì)外泌體相關(guān)DNA提取的影響


圖2：DnaseⅠ處理可提高外泌體相關(guān)DNA突變檢測(cè)的特異性







潤(rùn)基生物在外泌體提取和DNA/RNA分離純化方面積累了豐富經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合我們的實(shí)驗(yàn)條件，可以提供：

1、外泌體的提取和純化，外泌體定量（NTA和ELISA）。

2、外泌體核酸分離和純化，外泌體核酸檢測(cè)（qPCR或NGS）。

3、外泌體蛋白質(zhì)鑒定，如Western Blot,蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析等。



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